کلون، بیان و تخلیص مایکولیل ترانسفراز c مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در میزبان پروکاریوتی

نویسندگان

haniyeh aghababa

department of bacteriology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran ashraf mohabbati mobarez

department of bacteriology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran mehrdad behmanesh

department of genetics, faculty of biological sciences, tarbiat modares university, tehran, iran nima khoramabadi

department of bacteriology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran mehdi nejati

چکیده

هدف: کمپلکس آنتی‏ژن 85 مایکوباکتریوم توبرکلوزیس شامل سه پروتئین ترشحی است که خاصیت ایمنی‏زایی دارند. این پروتئین‏ها کاندیداهای مهمی در طراحی واکسن سل هستند. برای استفاده از این پروتئین‏ها به‏عنوان واکسن‏های زیرواحدی یا به‏عنوان یادآور برای bcg نوترکیب یا واکسن‏های dna، تولید آنتی‏ژن‏های پروتئینی به شکل نوترکیب الزامی است. پروتئین‏های مایکوباکتریوم که در دیواره هستند نسبتاً غیرقطبی است و تولید آن‏ها به شکل نوترکیب در سویه بیانی اشریشیا کلی با پروتئین‏های دیگر متفاوت است. هدف از این مطالعه تولید و تخلیص آنتی‏ژن نوترکیب 85c به‏عنوان یک ایمنوژن است. مواد و روش‏ها: آنتی‏ژن 85c در حامل پلاسمیدی pjet1.2 و در نهایت در pet32a(+) کلون و در هر دو پلاسمید تعیین توالی شد. القای تولید پروتئین با iptg صورت گرفت و تخلیص با حل کردن اجسام توده‏ای داخل سلولی در اوره، جذب با رزین نیکل، حذف اوره با شیب کاهشی اوره در محلول‏های شستشو و در نهایت جمع‏آوری پروتئین نوترکیب به شکل محلول انجام شد. تأیید آنتی‏ژنیک پروتئین نوترکیب با وسترن بلات و توسط آنتی‏بادی ضد پلی‏هیستیدین، آنتی سرم پلی‏کلونال خرگوشی ضد مایکوباکتریوم توبرکولوزیس و سرم بیمار سلی بستری انجام شد. نتایج: ژن آنتی‏ژن 85c با موفقیت کلون و با تعیین توالی تأیید شد. آنتی‏ژن 85c در میزبان اشریشیا کلی بیان و تخلیص شد. نتیجه‏گیری: نتایج وسترن بلات به موازات نتایج تعیین توالی نشان دهنده درستی تولید پروتئین آنتی‏ژن 85c نوترکیب و حفظ نسبی ساختار اپی‏توپی آن است.

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین پیلین سودوموناس آئروژینوزا در میزبان پروکاریوتی

زمینه و اهداف: سویه های پاتوژن سودوموناس آئروژینوزا پیلی قطبی تولید می کند که برای تحرک، چسبندگی و تهاجم مورد نیاز است. هدف از این مطالعه تولید و تخلیص پروتئین نوترکیب پیلین می باشد. مواد و روش ‌ ها: ژن کد کننده پیلین (pilA) از سویه PAO1 سودوموناس آئروژینوزا با بوسیله PCR جدا گردید و در وکتور بیانی pET-22b کلون شد. تایید ساختار وکتور نوترکیب به وسیله ی هضم آنزیمی دوگانه و تعیین توالی صورت گرفت....

متن کامل

کلون کردن ژنm2e ویروس آنفولانزا تیپ آبه همراه ژن 70-hsp مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در وکتور پروکاریوتی

71 بحث 7 2 تکثیر گردید.پس از تأیید قطعات محصول hsp و 70 m2e ژن ،pcr باطراحی پرایمرجهت بر روی ژل، در مرحله بعد جهت تخلیص باند مورد نظر و حذف دیگر ترکیبات و pcr را در این مرحله به مقدار زیاد انجام دادیم،رعایت این pcr ,pcr ناخالصی های موجود در واکنش ، pcr در 50 درصد از نمونه انجام می گیرد 0 تخلیص محصول pcr نکته الزامی بود که واکنش بهینه می باشد. به همین دلیل با تخلیص دقیق باند مورد نظر liga...

15 صفحه اول

کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین پیلین سودوموناس آئروژینوزا در میزبان پروکاریوتی

زمینه و اهداف: سویه های پاتوژن سودوموناس آئروژینوزا پیلی قطبی تولید می کند که برای تحرک، چسبندگی و تهاجم مورد نیاز است. هدف از این مطالعه تولید و تخلیص پروتئین نوترکیب پیلین می باشد. مواد و روش ها: ژن کد کننده پیلین (pila) از سویه pao1 سودوموناس آئروژینوزا با بوسیله pcr جدا گردید و در وکتور بیانی pet-22b کلون شد. تایید ساختار وکتور نوترکیب به وسیله ی هضم آنزیمی دوگانه و تعیین توالی صورت گرفت. و...

متن کامل

کلون، بیان و تخلیص پروتئین P647-153هموفیلوس آنفلوانزا

  زمینه و هدف: همـوفیلوس آنفلوانزا، باسیل گرم منفی است که بخشی از میکروفلور نازوفارنکس را در اغلب افراد تشکیل داده و سویه های مختلف آن در دو گروه کپسولدار (قابل طبقه بندی) و بدون کپسول (غیرقابل طبقه بندی) مورد مطالعه قرار می­گیرد. پروتئین غشاء خارجی P6 ، نوعی ایمونوژن حفاظت شده و پایدار درمیان سویه­های فاقد کپسول و نیز سویه‏های کپسولدار هموفیلوس آنفلوانزا می­باشد و خود بعنوان کاندید مناسبی جهت ...

متن کامل

رنگ آمیزی معکوس: روشی مؤثر برای تخلیص پروتئین HIV-1 Nef در سیستم بیان پروکاریوتی

سابقه و هدف: پروتئین Nef، یکی از پروتئین­ های تنظیمی ویروس HIV، دارای اپی­توپ­ های حفاظت شده متعددی است که در افراد آلوده به ایدز پاسخ­ های ایمنی قدرتمندی علیه آن ها مشاهده شده است. بنابراین، پروتئین Nef کاندید مناسبی برای تولید واکسن می­ باشد. هدف این پژوهش کلونینگ و بیان پروتئین Nef در سیستم بیان پروکاریوتی و تخلیص آن به روش رنگ­آمیزی معکوس می­ باشد. مواد و روش­ ها: توالی کدکننده پروتئین Nef ...

متن کامل

کلون، بیان و تخلیص پروتئین p۶۴۷-۱۵۳هموفیلوس آنفلوانزا

زمینه و هدف: همـوفیلوس آنفلوانزا، باسیل گرم منفی است که بخشی از میکروفلور نازوفارنکس را در اغلب افراد تشکیل داده و سویه های مختلف آن در دو گروه کپسولدار (قابل طبقه بندی) و بدون کپسول (غیرقابل طبقه بندی) مورد مطالعه قرار می­گیرد. پروتئین غشاء خارجی p6 ، نوعی ایمونوژن حفاظت شده و پایدار درمیان سویه­های فاقد کپسول و نیز سویه‏های کپسولدار هموفیلوس آنفلوانزا می­باشد و خود بعنوان کاندید مناسبی جهت وا...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید


عنوان ژورنال:
پژوهش های آسیب شناسی زیستی

جلد ۱۴، شماره ۴، صفحات ۱-۱۲

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023